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細(xì)胞實驗室建設(shè)規(guī)劃及要求
更新時間:2022-09-16 10:06:14瀏覽次數(shù):0

細(xì)胞培養(yǎng)室的規(guī)劃

細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌技術(shù),要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物和不受其他有害因素的影響。為防止微生物污染和有害因素的影響,細(xì)胞培養(yǎng)室要求環(huán)境清潔,空氣清新、干燥、無塵。

細(xì)胞培養(yǎng)實驗室由無菌操作區(qū)、孵育區(qū)、制備區(qū)、儲藏區(qū)、清洗和消毒滅菌區(qū)6部分組成,這些區(qū)域的共同特點(diǎn)是房間要寬敞、明亮,地面要便于清潔、防滑,墻壁的質(zhì)地光滑堅硬,儀器設(shè)備布局合理,方便操作,避免交叉干擾,陳設(shè)簡潔,便于清掃。

無菌操作區(qū)

無菌操作區(qū)是只限于細(xì)胞培養(yǎng)及其他無菌操作的區(qū)域,最好能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。在一般環(huán)境的空氣中,由于存在許多塵埃和雜菌,較易造成污染。

因此,接種工作要在空氣經(jīng)過滅菌的環(huán)境里進(jìn)行,小規(guī)模的無菌環(huán)境可利用超凈工作臺創(chuàng)造,大規(guī)模的需建無菌室。

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理想的無菌操作室應(yīng)劃為三部分∶

1、更衣室:供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。

2、緩沖間:位于更衣間與操作間之間,用于準(zhǔn)備工作,還有防止污染的作用,以保證操作間的無菌環(huán)境,同時可放置恒溫培養(yǎng)箱以及必需的小型儀器。

3、無菌操作間:無菌操作間則專用于無菌操作、細(xì)胞培養(yǎng),其大小要適當(dāng),且其頂部不宜過高以保證紫外線的滅菌效果;墻壁光滑無死角以便清洗和消毒,無菌操作間容積小且為密閉式,一般無菌操作間的空氣消毒用紫外線燈,有的實驗室使用無臭氧紫外線消毒器或電子消毒滅菌器。

凈化工作臺∶操作簡單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細(xì)菌培養(yǎng)室使用的凈化工作臺主要有兩種:(a)側(cè)流式或稱垂直式(b)外流式或稱水平層流式。

孵育區(qū)

孵育區(qū)也稱培養(yǎng)區(qū),本區(qū)對無菌的要求雖不比無菌區(qū)嚴(yán)格,但仍需清潔無塵,因此也應(yīng)設(shè)置在干擾少而非來往穿行的區(qū)域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進(jìn)行,后者費(fèi)用高,一般實驗室多采用孵箱進(jìn)行工作。

2制備區(qū)

制備區(qū)主要進(jìn)行培養(yǎng)液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體等的制備。應(yīng)設(shè)有試劑柜、器械柜、實驗臺和上水道、電源等,配備的主要儀器設(shè)備有水純化裝置、天平、微波爐、pH計、抽氣泵、電爐、培養(yǎng)分裝器、各種規(guī)格的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶等。

在有天平、pH計、磁力拌器等設(shè)備下完成制備以后,應(yīng)在無菌操作臺進(jìn)行過濾除菌。液體制備直接關(guān)系組織細(xì)胞養(yǎng)的成敗,因此必須嚴(yán)格無菌操作。

儲藏區(qū)

儲藏區(qū)主要存放各類冰箱、干燥箱、液氫罐、無菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等,此環(huán)境也需要清潔無塵。為了保存細(xì)胞,特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株,要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般為液氫溫度-196℃。

細(xì)胞的凍存過程需要一系列程序降溫,一般為4℃下存放30min。轉(zhuǎn)放-20 ℃ 1 h,再轉(zhuǎn)入-80~-70℃過夜,之后才可以轉(zhuǎn)移到液氫內(nèi)(-196℃)。因此儲存區(qū)必須配備冰箱、低溫冰箱、超低溫冰箱和液氫罐等設(shè)備。

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清洗和消毒滅菌區(qū)

清潔和消毒滅菌區(qū)應(yīng)與其他區(qū)域分開,主要進(jìn)行所有細(xì)胞培養(yǎng)器皿的清洗、準(zhǔn)備、消毒及三蒸水制備等工作,應(yīng)備有高壓蒸汽滅菌鍋、細(xì)菌過濾設(shè)備、電熱干燥箱、消毒柜、排風(fēng)設(shè)備等。

細(xì)胞實驗室的建設(shè)要求


? 環(huán)境要求

溫度:儀器還是操作對溫度沒有特殊要求,維持舒適的溫度即可,比如18~26度。

濕度:過高的濕度會導(dǎo)致微生物的滋生,所以建議正常維持濕度在70%以下。

潔凈度:細(xì)胞實驗對潔凈區(qū)并沒有要求,細(xì)胞實驗里面只有細(xì)胞操作的時候要求無菌的環(huán)境,這時要求有局部的百級,通??梢岳贸瑑襞_或者生物安全柜來實現(xiàn),不過有時候為了有個更好一點(diǎn)的環(huán)境,減小超凈臺過濾器更換的時間,會維持室內(nèi)的潔凈度,比如萬級的潔凈度。

無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。細(xì)胞培養(yǎng)對無菌環(huán)境要求很高,在細(xì)胞操作時,一般需要在100級空氣質(zhì)量條件下進(jìn)行。

在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染,或者自身代謝物質(zhì)積累,可導(dǎo)致細(xì)胞中毒死亡。

照明︰滿足實驗用的操作照度,通常在300LUX。

? 圍護(hù)結(jié)構(gòu)要求

雖然實驗的操作對大環(huán)境沒有特殊要求,不過最好能有不產(chǎn)塵、不積塵的環(huán)境,能保證室內(nèi)的清潔,并且易于清洗、不容易滋生微生物,所以在選擇維護(hù)結(jié)構(gòu)時,選用彩鋼板、醫(yī)療板等潔凈板材是比較好的選擇,為了保證室內(nèi)的通透性,可以布置密閉窗。

消毒

通常做完實驗后,都需要做終末消毒,室內(nèi)需要安裝紫外燈,利用紫外燈對空氣和表面消毒。

細(xì)胞實驗室建設(shè)的注意事項

1、放置細(xì)胞培養(yǎng)的實驗室,空調(diào)需要能保證在冬季能制冷,特別是在密閉的環(huán)境里,培養(yǎng)箱等設(shè)備的散熱量會比較大,導(dǎo)致室內(nèi)溫度過高。

2、如果設(shè)計成凈化實驗室,就需要按凈化實驗室的要求去做,如果做的細(xì)胞涉及到生物安全,則必須按照生物安全實驗室去設(shè)計,具體根據(jù)所做實驗的種類,來確定實驗室的設(shè)計要求以及選擇的設(shè)備,是選擇超凈工作臺還是生物安全柜。

3、從事臨床細(xì)胞治療的,需要按照具體的規(guī)范要求建設(shè)。

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